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生化試劑盒
- 脂肪酶(LPS)試劑盒- 微量法
- 恒遠(yuǎn)生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無(wú)機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測(cè)樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測(cè)儀器為酶標(biāo)儀，分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測(cè)服務(wù)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫(kù)存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格，所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)
| 中文名稱 |
脂肪酶(LPS)試劑盒 |
| 規(guī)格 | 96樣 |
| 貨號(hào) |
L-723-SH |
| 價(jià)格 | ￥600 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等 |
| 檢測(cè)范圍 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書 |
| 檢測(cè)方法 |
微量法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說(shuō)明書 | 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
| 文獻(xiàn) | 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見(jiàn)于胰腺炎和胰腺癌。
測(cè)定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）。
試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體10 μL×1瓶，10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體: 直接檢測(cè)。
LPS測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min。
3. 在1.5mL EP管中依次加入下列試劑
|
試劑名稱（μL） |
空白管 |
測(cè)定管 |
|
蒸餾水 |
150 |
|
|
樣本 |
|
50 |
|
試劑一 |
300 |
300 |
|
試劑二 |
|
100 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
|
試劑三 |
800 |
800 |
|
試劑名稱（μL） |
空白管 |
測(cè)定管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
|
上清液 |
400 |
400 |
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品 |
|
|
400 |
|
試劑四 |
100 |
100 |
100 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測(cè)定吸光值。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
LPS活性計(jì)算公式：
1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W
（3）按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]
C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。
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