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生化試劑盒

直鏈淀粉含量試劑盒-微板法

淀粉提取: 

稱取0.01~0.02g烘干樣本(建議稱取約0.01g)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑二(乙醚)振蕩5min3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑三充分溶解,90℃水浴10min,冷卻后待測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。

測定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL樣本, 14μL試劑四,120μL蒸餾水,2μL試劑五,44uL蒸餾水,混勻,測定620nm處吸光值,記為A測定。

空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL試劑三, 14μL試劑四,120μL蒸餾水,2μL試劑五,44μL蒸餾水,混勻,測定620nm處吸光值,記為A空白。

 

 

中文名稱 直鏈淀粉含量試劑盒
規(guī)格 96樣
貨號 E-356-SH
價格 ¥1500
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法 微板法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取


    正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

 

測定原理:

利用80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在620nm下有吸收峰。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀/可見分光光度計、水浴、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶;4℃保存;

試劑二:乙醚100mL×1瓶;(自備)

試劑三:液體100mL×1瓶;4℃保存;

試劑四:液體2mL×1瓶;4℃保存;

試劑五:液體300uL×1瓶;4℃保存;

 

淀粉提取: 

稱取0.01~0.02g烘干樣本(建議稱取約0.01g)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑二(乙醚)振蕩5min3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑三充分溶解,90℃水浴10min,冷卻后待測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。

測定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL樣本, 14μL試劑四,120μL蒸餾水,2μL試劑五,44uL蒸餾水,混勻,測定620nm處吸光值,記為A測定。

空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL試劑三, 14μL試劑四,120μL蒸餾水,2μL試劑五,44μL蒸餾水,混勻,測定620nm處吸光值,記為A空白。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

直鏈淀粉含量計算:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=1.755x+0.0062;x標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y吸光

1按照蛋白濃度計算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測定-A空白-0.0062V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A測定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測定-A空白-0.0062V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A測定-A空白-0.0062) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mLV2:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣質(zhì)量,g

 

b. 96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y= 0.8775x+0.0062;x標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y吸光

1按照蛋白濃度計算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測定-A空白-0.0062V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A測定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測定-A空白-0.0062V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A測定-A空白-0.0062) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mLV2:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣質(zhì)量,g

最低檢測限為1mg/g干重或10μg/mgprot

 

 



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