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生化試劑盒

葡萄糖含量試劑盒-可見分光光度法

測定原理

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。

中文名稱 葡萄糖含量試劑盒
規(guī)格 48樣
貨號(hào)

E-318-SH

價(jià)格 ¥700
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法 可見分光光度法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取


    正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。


測定原理

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。


自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水


試劑的組成和配制:

試劑一:0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體 25ml×1瓶,4℃保存;

試劑三:液體 25ml×1瓶,4℃保存;(若出現(xiàn)結(jié)冰現(xiàn)象,可37℃水浴溶解后使用)


葡萄糖提取

1、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g:蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),研磨成勻漿,95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g25離心10min,取上清液備用。

2、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g25離心10min,取上清液備用。


測定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至505nm,蒸餾水調(diào)零。

2混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,用多少配多少。

3、加樣表在EP中加入下列試劑

試劑(μL

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測定管

樣本

 

 

100

試劑一

 

100

 

蒸餾水

100

 

 

混合試劑

900

900

900

 

混勻,置37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中,保溫15min505nm波長處讀取吸光度。空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管吸光值分別記為A1A2A3。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。



葡萄糖含量計(jì)算:

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

葡萄糖含量(μmol/g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷

(A2-A1)

C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5μmol/mLV1:加入樣本體積,0.1mLV2:加入提取液體積,1mL Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本鮮重,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

 

注意:

1最低檢測限為50nmol/g鮮重或0.5nmol/mg prot

2若樣本中存在葡萄糖氧化酶抑制劑,則會(huì)造成測定結(jié)果偏低,建議改用HPLC法測定。

 


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