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生化試劑盒
- α-淀粉酶試劑盒-可見分光光度法
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測(cè)定原理：
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱，在70℃鈍化15min，從而測(cè)定α-淀粉酶活性。
| 中文名稱 |
α-淀粉酶試劑盒 |
| 規(guī)格 | 24樣 |
| 貨號(hào) |
E-363-SH
|
| 價(jià)格 | ￥230 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等 |
| 檢測(cè)范圍 | 詳見說明書 |
| 檢測(cè)方法 |
可見分光光度法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說明書 | 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
| 文獻(xiàn) |
咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。
測(cè)定原理：
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱，在70℃鈍化15min，從而測(cè)定α-淀粉酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：25mL×1瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需90℃加熱溶解后再用；
試劑二：20mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需70℃加熱溶解后再用。
粗酶液提取：
組織：稱取0.1~0.2g樣本（建議稱取約0.1g樣本），加1 mL蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心管中，在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提取；3000g，25℃離心10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。
血清（漿）：直接檢測(cè)。
操作步驟和加樣表（在1.5mLEP管中依次加入下列試劑）：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一或試劑二40℃預(yù)熱10min
3、測(cè)定步驟
|
試劑（μL） |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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α 淀粉酶原液 |
250 |
250 |
70℃水浴15min左右，冷卻
|
蒸餾水 |
250 |
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|
試劑二 |
|
250 |
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min
|
試劑一 |
500 |
500 |
混勻，95℃水浴5min，冷卻， 540nm處讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光度，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。
α-淀粉酶活性計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、α 淀粉酶活性
（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（漿）樣本中α 淀粉酶活性計(jì)算
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；V樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min。
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